Banca de DEFESA: NAYARA SILVA OLIVEIRA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: NAYARA SILVA OLIVEIRA
DATA: 24/06/2022
HORA: 09:30
LOCAL: HIBRIDO: Sala de Aula do PPGPDSA e Sala Virtual- Plataforma Microsoft Teams
TÍTULO:

"IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR E CARACTERIZAÇÃO GENOTÍPICA DE ISOLADOS DE Malassezia sp. DE CÃES COM OTITE EXTERNA"

PALAVRAS-CHAVES:

Leveduras oportunistas; Filogenia; Malasseziose

 

PÁGINAS: 45
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Medicina Veterinária
RESUMO:

Malassezia é um gênero de leveduras lipodependentes, que vive na superfície da pele e mucosas de diversos mamíferos e aves. A espécie Malassezia pachydermatis é a mais atribuída na casuística de otite externa fúngica em cães, sendo considerada uma desordem cutânea multifatorial, caracterizada principalmente por inflamação no conduto auditivo de cães. Neste sentindo, este trabalho teve como objetivo caracterizar os isolados de Malassezia sp. obtidos de cães com otite externa, em relação às suas características bioquímicas, identificação molecular e análise filogenética, atendidos no Hospital Veterinário Universitário “Fancisco Edilberto Uchôa Lopes” (HVU – UEMA) da cidade de São Luís/MA. Para identificação direta, isolamento fúngico e provas bioquímicas, foram coletadas 110 amostras do conduto auditivo de 55 cães, através de swabs estéreis no terço proximal da porção externa do meato acústico, sendo realizado duas coletas em cada orelha, uma para  confecção do esfregaço para exame direto e outra utilizado para cultivo fúngico. Para análise molecular, foram utilizadas 32 amostras, utilizando o protocolo de extração de DNA de fenol/clorofórmio/isoamílico e PCR convencional para a amplificação da região D1/D2 da subunidade maior do gene 26S rRNA, seguido do sequenciamento. A edição e análise filogenética das sequencias foram realizadas em programas específicos. No exame direto das 110 amostras, foi observado que em 100 (90,9%) havia presença de algum agente microbiano (leveduras e bactérias), em 71 foram observadas somente estruturas semelhantes a Malassezia sp., e em 20 foi caracterizada a presença de infecção mista, com bactérias e leveduras. Malassezia sp. foi isolada em 83 (75,45%) das 110 amostras de swab colhidos, sendo todas positivas no teste bioquímico de catalase, enquanto que para o teste de urease, verificou-se positividade em 80 (96,4%) das amostras isoladas, podendo inferir que a espécie em estudo se tratava de M. pachydermatis. Quanto as análises moleculares, das 32 amostras isoladas sugestivas de Malassezia sp. submetidas à PCR convencional, 24 apresentaram padrão de banda de 600pb. A análise BLAST de 15 sequências da região D1/D2 da subunidade maior do gene 26S rRNA, dos isolados revelou que 14 eram idênticas a várias sequências de DNA ribossômico de Malassezia pachydermatis e uma para Malassezia furfur, mostrando 100% de cobertura e 100% de identidade. A analise filogenética, as sequências formaram dois clados bem suportados, o primeiro agrupou sequências de Malassezia pachydermatis com índices de boostrap de 100 e 99% nas duas análises realizadas (agrupamento de vizinhos e máxima verossilhança, respectivamente), o segundo clado reuniu a única sequência de Malassezia furfur obtida nesse estudo formando um grupo bem suportado com sequências do Genbank (agrupamento de vizinhos – 99% e máxima verossilhança 94%, respectivamente). O clado de Malassezia pachydermatis formou ainda, dois sub grupo com fortes valores de boostrap nas análises de agrupamento de vizinhos e máxima verossilhança, indicando uma variação intraespecífica A importância de estudos acerca de Malassezia sp. no acometimento de cães com otite externa é observada através da frequência de detecção desse patógeno na maioria dos casos avaliados. A identificação de M. furfur através do sequenciamento, demonstra a importância de análises moleculares, a fim de se identificar corretamente o agente etiológico e detectar a variabilidade genética interespecífica do gênero Malassezia.

 

MEMBROS DA BANCA:
Presidente(a) - 6443 - ELMARY DA COSTA FRAGA
Interno - 7319 - ALCINA VIEIRA DE CARVALHO NETA
Externo à Instituição - ANGELITA DOS REIS GOMES - UFPel