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CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR E PRESERVAÇÃO DE ISOLADOS DE BACTÉRIAS DIAZOTRÓFICAS ASSOCIADAS AO ARROZ.
Métodos de conservação, bactérias não patogênicas, fixação biológica de nitrogênio.
O Nitrogênio é um dos nutrientes mais requeridos para a cultura do arroz. Bactérias diazotróficas exercem papel importante na fixação biológica de nitrogênio nas plantas, através da síntese da nitrogenase. A conservação de microrganismos como recursos genéticos é importante para atender as necessidades e demandas da pesquisa agrícola. Os isolados bacterianos preservados em laboratório devem manter suas características originais, e livres de mutações. Este trabalho teve como objetivo avaliar em isolados bacteriano métodos para preservação, e uma caracterização molecular pela presença dos genes nifs D e H, importantes na fixação biológica de nitrogênio para a cultura do arroz. Foi realizada a comparação entre os métodos de preservação dos microrganismos a fim de detectar qual deles asseguram a viabilidade, morfologia, fisiologia e genética dos isolados, mantendo a cultura viável por longo tempo. Quanto a caracterização da variabilidade genética, foram testados os métodos de agrupamento entre os isolados, visando a formação de grupos com a maior distância genética identificada. Para a confirmação da presença do gene nif no genoma dos isolados, foram utilizados primers específicos, e as sequências obtidas foram validadas e comparadas com o banco de dados de nucleotídeos National Center for Biotechnology Information (NCBI). A criopreservação confere a melhor preservação dos isolados e ainda, quanto a conservação dos isolados, estes se mantiveram com sobrevida, estavéis e puros diante dos métodos de preservação, mantendo suas configurações e especificidades genéticas e fenotípicas. Os isolados apresentaram altas taxas de similariedade para os genes nifD e nifH do gênero das Pseudomonas. Esse tipo de estudo é importante para contribuir com as pesquisas referentes à análise de DNA e mapeamento genético, e para enfatizar a importância da manutenção de coleções vivas para estudos filogenéticos.